Tìm kiếm

  • Đang tải Tìm kiếm
  • Được Tìm nhiều nhất:

Thư mục

Ứng dụng trên di động

Ứng dụng Thư viện Violet

Hỗ trợ kĩ thuật

Thống kê

  • truy cập   (chi tiết)
    trong hôm nay
  • lượt xem
    trong hôm nay
  • thành viên
  • Dành cho Quảng cáo

    Chào mừng quý vị đến với Thư viện Bài giảng điện tử.

    Quý vị chưa đăng nhập hoặc chưa đăng ký làm thành viên, vì vậy chưa thể tải được các tư liệu của Thư viện về máy tính của mình.
    Nếu đã đăng ký rồi, quý vị có thể đăng nhập ở ngay ô bên phải.

    Nhân dòng đọc trình tự và biểu hiện trong P.pastoris một cDNA xylanase được phân lập từ Aspergillus awamoris

    Nhấn vào đây để tải về
    Báo tài liệu có sai sót
    Nhắn tin cho tác giả
    (Tài liệu chưa được thẩm định)
    Nguồn:
    Người gửi: Nguyễn Hải Chiều
    Ngày gửi: 15h:07' 08-11-2009
    Dung lượng: 11.3 MB
    Số lượt tải: 26
    Số lượt thích: 0 người
    Hướng dẫn: Ths. Trịnh Đình Khá
    Nhân dòng đọc trình tự và biểu hiện trong
    Pichia pastoris một cDNA xylanase vừa
    được phân lập từ Aspergillus awamoris
    ĐẠI HỌC KHOA HỌC
    Bô môn khoa học sự sống
    Bài đăng trên tạp chí công nghệ sinh học Châu Phi, tháng 12 năm 2008
    Thái Nguyên 2009
    Giới thiệu về xylan và xylanase
    Xylan là gì?

    Là một thành phần của hemicelluloses mà cấu tử chính là các xylose.
    Được coi là một loại polimer sinh học phổ biến (thứ 2 sau cellulose).
    Xylanase là gì?

    Một loại protein Enzyme
    Xylanase xúc tác cho phản ứng nội thủy phân liên kết 1-4-β-xylosidic

    Trong công nghiệp giấy
    Trong công nghiệp thực phẩm
    Trong công nghiệp sản xuất thức ăn chăn nuôi (SEBphytase 2MG, Chế phẩm sinh học Trichoderma…)

    Ứng dụng của xylanase
    Hướng nghiên cứu về xylanase hiện nay
    Tìm kiếm chủng mới có thể sản xuất xylanase

    Nhân dòng và biểu hiện gen xylanase
    Chủng giống
    Aspergillus được thu thập
    E.coli JM109 sử dụng như tế bào chủ nhân dòng
    Pichia pastoris tế bào chủ nhân dòng và biểu hiện
    NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
    Các môi trường nuôi cấy
    N
    G
    U
    Y
    Ê
    N

    L
    I

    U



    P
    H
    Ư
    Ơ
    N
    G

    P
    H
    Á
    P
    Phân lập chủng sản xuất xylanase
    Các chủng khác nhau bao gồm Aspergillus sp. SH-2016 được phân lập từ các mẫu đất, phương thức phân lập chi tiết thực hiện theo phương pháp đã được Abrusci mô tả (Abrusci, 2005).
    N
    G
    U
    Y
    Ê
    N

    L
    I

    U



    P
    H
    Ư
    Ơ
    N
    G

    P
    H
    Á
    P
    Phân lập gen

    Chuẩn bị RNA tổng số thực hiện theo phương pháp của Chomozynsky và Sachi (1987)
    Tổng hợp và khuếch đại cDNA
    Nhân dòng gen và đọc trình tự
    N
    G
    U
    Y
    Ê
    N

    L
    I

    U



    P
    H
    Ư
    Ơ
    N
    G

    P
    H
    Á
    P
    N
    G
    U
    Y
    Ê
    N

    L
    I

    U



    P
    H
    Ư
    Ơ
    N
    G

    P
    H
    Á
    P
    Kết quả đọc trình tự gen mã hóa xylanase
    Các bước biểu hiện gen
    Thiết kế vector biểu hiện
    Thao tác với DNA và biến nạp
    Tinh sạch và biểu hiện protein
    Xác định hoạt độ của xylanase
    N
    G
    U
    Y
    Ê
    N

    L
    I

    U



    P
    H
    Ư
    Ơ
    N
    G

    P
    H
    Á
    P
    Thiết kế vector biểu hiện
    Thực hiện phản ứng PCR với mồi xuôi có điểm nhận biết của EcoR I mồi ngược có điểm nhận biết của Xho I
    Xử lý vector và sản phẩm PCR với enzyme EcoR I và Xho I. Sau đó nối bằng Lygase
    Biến nạp vào E.coli
    Tách plasmid từ E.coli đã tái tổ hợp thành công
    Chuyển vào P.pastoris nhờ tạo lỗ bằng điện
    N
    G
    U
    Y
    Ê
    N

    L
    I

    U



    P
    H
    Ư
    Ơ
    N
    G

    P
    H
    Á
    P
    Thao tác DNA và biến nạp
    Thao tác DNA, phân lập plasmid, và điện di trên gel agarose được thực hiện theo Sambrock (Sambrock, 2001).
    Biến nạp vào E.coli được thực hiện theo Chung (Chung, 1989).
    N
    G
    U
    Y
    Ê
    N

    L
    I

    U



    P
    H
    Ư
    Ơ
    N
    G

    P
    H
    Á
    P
    Tinh sạch và biểu hiện protein
    Chọn khuẩn lạc chuyển vào môi trường BMGY nuôi cấy qua đêm
    Ly tâm 6000 vòng/10 phút thu tế bào
    Chuyển sang môi trường BMMY (nuôi trong 3 ngày) được cảm ứng bằng methanol
    Sau khi biểu hiện, dịch lên men lỏng được ly tâm ở 8000 vòng/10 phút ở 4°C thu dịch nổi lấy enzyme thô
    Tinh sạch enzyme bằng cách sử dụng cột NI2±NTA

    N
    G
    U
    Y
    Ê
    N

    L
    I

    U



    P
    H
    Ư
    Ơ
    N
    G

    P
    H
    Á
    P
    Phân tích hoạt độ enzyme
    (phương pháp dinitrosalisilic,Miller,1959)
    Hỗn hợp phản ứng gồm: 1ml dịch xylan trong đệm nitrate 50mM, pH=5. Thêm vào 1ml enzyme
    Ủ ở 50°C trong 30 phút
    Xác định hoạt độ bằng quang phổ
    N
    G
    U
    Y
    Ê
    N

    L
    I

    U



    P
    H
    Ư
    Ơ
    N
    G

    P
    H
    Á
    P

    Dựa trên các đặc điểm hình thái sinh lý và
    hóa sinh

    Dựa trên kết quả phân tích trình tự gen ITS
    rDNA
    Nhận biết được chủng Aspergillus sp
    SH-2016 (A. awamori)
    KẾT QUẢ
    K

    T

    Q
    U

    Cây phân loại
    Thiết kế được vector biểu hiện

    Biểu hiện và tinh sạch protein
    K

    T

    Q
    U

    Biểu hiện được gen sinh xylanase trong Pichia pastoris
    Tinh sạch được enzyme tái tổ hợp
    K

    T

    Q
    U

    Ảnh hưởng của pH tới hoạt tính của xylanase
    K

    T

    Q
    U

    Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính của xylanase
    K

    T

    Q
    U

    Ảnh hưởng của một số chất đến hoạt tính của xylanase
    K

    T

    Q
    U

    Nhóm thực hiện :
    Nguyễn Hải Chiều
    Đoàn Thị Hoài
    Trương Văn Hướng
    Vũ Xuân Lãm
    Đào Thanh Quyên
    Hứa Đức Thái
    Nguyễn Thị Thủy
    Thank you for anttention !
     
    Gửi ý kiến